实验原理通过脂类染料（如苏丹黑或油红O）对血清脂蛋白进行预染，再将预染血清置于琼脂糖凝胶板上实施电泳分离。在通电后，脂蛋白朝向正极移动，并分离形成多个区带。

## 试剂与器材

1. **巴比缓冲液**（pH 8.6，离子强度 0.075）：此缓冲液作为电极缓冲液，由巴比/妥钠154g，巴比/妥276g，EDTA酸0.292g混合，加水至1000ml。

2. **三羟甲基氨基甲烷缓冲液**（pH 8.6）：此缓冲液用于凝胶，由三甲基氨基甲烷12.12g，EDTA酸0.29g，NaCl15.85g混合，加水至1000ml。

3. **琼脂糖凝胶**：琼脂糖0.45g，三羟甲基氨基甲烷缓冲液50ml，水50ml加热至沸腾，待琼脂糖溶解后立即停止加热。

4. **挖槽工具**：制作切口刀，刀口长15mm的刀片，中央夹一有机玻璃或木片，固定用螺丝，确保两刀片相距15mm。挖槽小匙：用直径15mm的铜丝约6cm长，锤平一端，砂纸磨光。

5. **电泳槽和电泳仪**：与血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的设备相同。

## 操作步骤

1. **预染血清**：将血清0.2ml与苏丹黑染色液0.2ml混合，置于37℃水浴染色30分钟后离心（2000转/分，约5分钟）。

2. **制备琼脂糖凝胶板**：将配制好的0.45%琼脂糖凝胶于沸水浴中加热融化，用吸管将凝胶溶液浇注于载玻片，每片25ml，静置约半小时后凝固（温度较高时可延长时间，或者放置于冰箱加速凝固）。

3. **点加血清**：在已凝固的琼脂糖凝胶板的一端约2cm处，用切口刀片垂直切入凝胶后立即取出，再用铜丝小匙将长方形小条凝胶取出。使用滤纸吸干小槽内水分，随后用血色素吸管吸取约15μl的预染血清，注入小槽内。

4. **电泳**：将含血清的凝胶板平行放入电泳槽中，样品位于阴极一侧。将两块三层纱布浸润于巴比/妥缓冲液中，轻轻贴于凝胶板两端，纱布另一端浸于电泳槽的巴比/妥缓冲液中（注意：此电极缓冲液不能用三羟甲基氨基甲烷缓冲液替代）。接通电源，电压设定在120~130V，每片电流为3~4mA。约经过15至55分钟后，分离出的色带即可观察。

## 注意事项

1. 电泳样品需使用新鲜的空腹血清。

2. 每块凝胶上可平行挖两条小槽，因此可以加入两个样品。

3. 若使用与小槽形状相同的有机玻璃片固定在适当位置，凝固后取出有机玻璃片，凝胶板上不需挖槽可直接加样。

4. 若需保留电泳样本，可将电泳后的凝胶板（连同玻片）置于清水中浸泡脱盐2小时，然后放入80℃烘箱中烘干。

## 结果及临床意义

1. 正常人血清脂蛋白通常显示三条区带，从负极到正极依次为β-脂蛋白（颜色最深）、前β-脂蛋白（颜色最浅）、α-脂蛋白（比前β-脂蛋白稍深），原点处应无乳糜微粒。

2. 若前β-脂蛋白颜色比α-脂蛋白深，并且血清甘油三酯明显升高而胆固醇正常或略高，则可诊断为Ⅳ型高脂蛋白血症。

3. 如果β-脂蛋白区域明显染色加深，同时血清总胆固醇增高而甘油三酯正常，则为Ⅱa型；若血清总胆固醇增高且甘油三酯略升高的前β略溶解者则为Ⅱb型。

4. 如果β-与前β-区带未分离，而是连在一起则称为“宽β区带”，此时血清甘油三酯和胆固醇均增高，可确诊为Ⅲ型。

5. 若原点处出现乳糜微粒，且β、前β均正常或降低且甘油三酯明显升高，则可诊断为Ⅰ型。

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