## 产品及特点

本产品是根据探针法荧光定量PCR原理研发的检测试剂盒，具有以下特点：

1. **即开即用**：用户只需提供样品DNA模板即可使用。

2. **高灵敏度**：引物等组分经过优化，确保检测的灵敏度极高。

3. **阳性对照提供**：配备阳性对照，方便区别假阴性样品。

4. **高特异性**：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列中高度保守的区域，确保不会与其他生物样本的DNA发生交叉反应。

5. **多用途检测**：可以用于定性和定量检测，定量检测时线性范围至少覆盖5个数量级。

6. **批量检测能力**：本产品足够支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. **科研用途**：本产品仅限于科研使用。

### 方法步骤

**一、DNA提取（样本制备区域）**：您可以使用自选方法提取纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

**二、稀释标准曲线样品（样本制备区域）**：由于阳性对照浓度高，请在独立区域内进行稀释操作，以避免污染。可参考以下步骤：

1. 标记6个离心管，依次编号为7，6，5，4，3，2。

2. 各管中均加入45μL DEPC-H2O。

3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，获得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用。

4. 更换枪头，在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品，放冰上待用。

5. 重复此操作直到获得6个不同稀释度的标准曲线样品，放冰上待用。如无需制作标准曲线，直接将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL即可。

**三、试剂配制（试剂准备区域）**：若有N个待检样品，准备N+2个qPCR管，向各PCR管中添加相应成分，详细说明可向我司索取。

**四、添加模板（模板添加区域）**：向qPCR管中分别加入2μL模板，顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒，立即进行扩增。

**五、扩增反应（扩增及产物分析区域）**：将PCR管放置于PCR扩增仪器的样品槽，按照扩增程序进行操作，具体详情可向我司索取。

**六、结果分析**：

1. 若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线，并推算样品DNA浓度的log值。

2. 如果未制作标准曲线，阳性对照的Ct值应<30，且呈现典型的S型曲线。阴性对照的Ct值为38或无Ct值，无明显指数增长。样本检测若Ct值<35，有明显指数增长，则为阳性；如Ct值在35-38范围内，需复检确认。如复检仍然在该范围内且有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

### 运输及保存

本产品需低温运输，储存条件为-20℃，保存期限为一年。阳性对照需单独放置，以防污染其他试剂。选择不朽情缘MG，我们致力于提供高品质的检测试剂，助您在生物医疗研究中取得更好的成果。