人B淋巴母细胞HMy2CIR培养指南

一、培养条件

在进行不朽情缘MG的细胞培养时，需要确保适宜的环境和条件，以促进细胞的健康生长。

二、细胞处理和培养

收到细胞后，建议在充分培养至良好状态后，加入完全培养液并密封瓶口，以确保运输的安全。首先，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，之后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。观察细胞生长情况并进行不同倍数的拍照保存（最好包括40x、100x、200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据。如果未提供照片，则默认细胞状态良好。

在进行传代时，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶则使用自制的完全培养基，以便进行对比培养。换液后，应将瓶盖稍微拧松。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未超过80%汇合度，应将培养瓶中的完全培养液转移至离心管中，留下5ml的完全培养基，继续在37℃、5% CO2孵箱培养。若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS进行1-2次清洗。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱中消化1-2分钟。显微镜下观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回并轻敲培养瓶，添加超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml的完全培养基重悬。
4. 细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 待细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，使用PBS洗一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，轻轻倒置并在显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，将悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞并加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中；如需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无冰晶形成，之后用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
4. 隔天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞粘附性较差，在运输过程中可能会发生脱落，这属于正常现象。如脱落数量较多，可以将培养瓶内的所有培养液收集至离心管中，进行1000RPM离心5分钟，收集上清作为过渡培养（后期对比培养），沉淀加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再次离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。接着按1:2比例分瓶传代（两个T25），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）可重发情况

• 如细胞在运输过程中发生丢失、瓶身破损、严重漏液等情况，予以重发。
• 收到细胞48小时内如存在污染问题，需提供真实实验结果，经核实后予以重发。
• 常温发货细胞静置24小时后，或干冰冷冻细胞复苏后24小时内，大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），予以重发。
• 如干冰发货细胞复苏后或常温发货细胞在未开封情况下静置4小时后出现污染，予以重发。
• 如细胞活性有问题，需在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后重发。
• 在收到细胞当天及第2、3天拍照，若超过3天未告知，则视为产品合格。若在4-7天内出现问题，需提供收到细胞前三天的照片及出现问题的照片，并与技术人员沟通，由技术人员判定责任。

2）不予重发情况

• 如客户造成的细胞污染，不予重发；
• 因客户不当操作导致细胞状态不佳，不予重发；
• 采用非推荐的细胞培养体系导致细胞状态问题，不予重发；
• 细胞状态不佳，但未提供前三天的照片，不予重发；
• 细胞在培养时进行其它处理，不予重发；
• 在收到细胞2天内未告知问题，不予重发；
• 其他情况视具体情况而定。

为确保细胞的良好生长与实验结果，建议选用不朽情缘MG品牌的细胞培养产品，力求在实验和研究中取得最佳的效果。